高脂饮食ApoE 基因敲除小鼠不同部位动脉粥样硬化斑块的分析比较

【摘要】　目的　比较高脂喂养的apoE 基因敲除小鼠主动脉窦部和头臂动脉粥样硬化斑块的病理组织学状况。方法　选取6 周龄雄性纯合子aopE 基因敲除小鼠30 只,均予以西方饮食喂养,分别在30 周龄、42 周龄、54 周龄、66 周龄、78 周龄时,随机各取6 只,取主动脉窦和头臂动脉做病理检测。酶法检测血脂情况,冰冻切片光镜下观察主动脉窦部和无名动脉粥样硬化斑块病理情况,von kossa 染色观察斑块钙化情况。结果　高脂喂养可使apoE 基因敲除小鼠迅速形成广泛且典型的动脉粥样硬化斑块,随时间进展,斑块体积逐渐增加,钙化逐渐加重;头臂动脉斑块出现较主动脉窦早且更加明显,斑块内包埋纤维帽,在主动脉窦斑块未见,但斑块钙化以主动脉窦部斑块最显著。结论　高脂喂养apoE 基因敲除小鼠是较为理想的动脉粥样硬化动物模型,头臂动脉是观察斑块不稳定的较为理想的窗口,而研究比较稳定斑块钙化,主动脉窦部更为理想。

ApoE 基因敲除小鼠是目前研究动脉粥样硬化较为常用的动物模型,高脂饮食条件下,形成动脉粥样硬化斑块的时间可大大缩短。现在对于ApoE 基因敲除小鼠观察动脉粥样硬化最常用的两个部位是主动脉窦和头臂动脉,二者在动脉粥样硬化的形成及病理特点上有何异同,是本实验的主要观察点,试想为今后的实验研究提供依据。

1 　材料和方法

1.1 　实验动物

6 周龄雄性aopE 基因敲除小鼠(北京大学医学部动物中心提供,合格证号为SCXK(京) 2002-0001)36 只,均予以西方饮食(常规小鼠饲料+ 21 %脂肪+ 0.15 %胆固醇) 喂养,分别在喂养分别在喂养24周、36 周、48 周、60 周、72 周,随机各取6 只处死,处死前,禁食12 h ,不禁水。

1.2 　血脂情况测定

眼眶取血,静置取血清,采用酶法分析,用分光光度仪(UV21206 ,日本导津) 测定样本的光密度值,根据标准液与待测样本光密度值之比计算出甘油三酯(triglyceride ,TG) 、总胆固醇(total cholesterol ,TC) 、低密度脂蛋白胆固醇( low density lipoproteincholesterol ,LDL-c) 、高密度脂蛋白胆固醇(high densitylipoproteincholesterol ,HDL-c) 等。试剂盒购自北京中杉生物科技有限公司

1.3 　病理观察

断颈处死动物后,PBS 灌流,冲洗,4 %多聚甲醛固定,20 %蔗糖脱水,取主动脉窦部和头臂动脉OCT包埋,液氮速冻。7μm 连续冰冻切片,每10 张切片取一张行HE 染色和油红“O”染色。Image J 软件分析测定脂质所占斑块面积比。每只小鼠共取6 张切片计算均值。

1.4 　von kossa 染色

冰冻切片水化,0.5 %硝酸银孵育,阳光下直射1 h ,5 %硫代硫酸钠洗,苏木精复染,脱水封片。

1.5 　统计学分析

用SPSS10.0 软件包建立数据库,组间比较用OneWay ANOVA 进行统计分析,各指标用x ±s 表示。